產(chǎn)品名稱：鼠尾直接PCR試劑盒(快速基因型鑒定)

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英文名稱：Mouse Direct PCR Kit

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儲存條件：-20°C

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應(yīng)用:科研

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鼠尾直接PCR試劑

（快速基因型鑒定)

【產(chǎn)品概述】

本試劑盒專為小鼠快速基因型鑒定而研制，能夠迅速從小鼠尾巴、耳朵或腳趾等組織中釋放足量的基因組DNA，無需抽提與純化，可直接將消化產(chǎn)物作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

【產(chǎn)品組分】

組分	100 rxns （20ul/rxn）	保存條件
鼠尾裂解液	10 ml	常溫
2x 直擴(kuò)PCRMix	1 mL	-20℃

【使用方法】

1.       消化裂解：取1-2mm左右的鼠尾置于離心管中，每管待鑒定的組織樣本中加入70ul 鼠尾裂解液，98℃孵育30分鐘。

2.       離心：12000 rpm，1min。

3.       基因鑒定：取0.5-1ul上清液用于PCR反應(yīng)基因鑒定（適用于20ul反應(yīng)體系，其他反應(yīng)體系按比例增加上清液使用量）。

【PCR 反應(yīng)鑒定】

一、PCR 反應(yīng)體系

組分	推薦用量	推薦終濃度
2x 直擴(kuò)PCR Mix	10ul	1X
Forward Primer(10uM)	0.5ul	0.2-0.4uM
Reverse Primer (10uM)	0.5ul	0.2-0.4uM
裂解產(chǎn)物（DNA模板）	1ul
ddH2O	補(bǔ)足至20ul

注：各組分使用前應(yīng)充分混勻。

1.       模板使用量：建議按1-10%總體系量取用模板，20ul體系建議采用1ul上清液作為模板。

2.       引物終濃度：0.2-0.4uM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時，可在0.1-0.5uM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。

3.       反應(yīng)體系：推薦使用20ul，也可根據(jù)使用習(xí)慣調(diào)整體系體積大小。

4.       體系配制：配制好PCR反應(yīng)體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應(yīng)液集于管底。

二、PCR 反應(yīng)條件

步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	98℃	3min	1 cycle
變性	98℃	15sec	35 cycles
退火	56℃	15sec
延伸	72℃	15sec/Kb
終延伸	72℃	5min	1 cycle

*退火溫度：請參考引物的理論Tm值，退火溫度可設(shè)置低于引物理論值2-5℃，或通過梯度PCR確定最佳溫度。

【瓊脂糖凝膠電泳】

PCR產(chǎn)物可直接點樣跑瓊脂糖凝膠（不需加 Loading Buffer）。

【對照反應(yīng)】

在PCR結(jié)果分析時，不管是陽性結(jié)果或陰性結(jié)果，如果沒有對照反應(yīng)，都不能確定結(jié)果是否可靠。為了便于后續(xù)實驗結(jié)果的分析，建議在進(jìn)行PCR時，設(shè)置陽性和陰性PCR對照反應(yīng)以便于排除假陽性或假陰性的干擾。

【注意事項】

1. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防護(hù)性措施進(jìn)行實驗操作。

3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！