產(chǎn)品名稱：TCA蛋白濃縮試劑盒

---

英文名稱：TCA Protein Precipitation Kit

---

儲存條件：RT

---

應用:科研

---

TCA蛋白濃縮試劑盒

TCA Protein Precipitation Kit

產(chǎn)品組分(50T)；

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	保存溫度
試劑A--沉淀劑	10ml	RT
試劑B--洗滌液	30ml	RT
試劑C--助沉淀劑	5ml	RT
試劑D--中和液	250ul	RT
1M  NaCI	1ml	RT
5×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（變性，還原）	1ML	-20℃
40mM 碳酸鈉	1ml	RT

產(chǎn)品簡介：

試劑盒原理：在酸性條件下，三氯醋酸（Trichloroacetic acid，TCA）與蛋白質(zhì)形成不溶性鹽，使蛋白質(zhì)變性導致構(gòu)象發(fā)生改變，蛋白暴露出較多的疏水性基團，蛋白發(fā)生聚集而沉淀。為了避免TCA對后續(xù)電泳的影響，沉淀的蛋白要使用洗滌液徹底清洗去除TCA。濃縮后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western blot 前的蛋白樣品處理。

操作方法：

1---準備1.5ml干凈的離心管，加入800ul蛋白樣品溶液。

可選：如果樣品溶液中離子強度低于10mM,補加8ul的1M NaCI溶液。若低于800ul的樣品，加入8ul 1M NaCI,用水補齊體積至800ul，使NaCI終濃度為10mM.

2---加入80ul試劑C-助沉淀劑，混勻，常溫靜置15min。

3---加入步驟2溶液1/8體積的試劑A -110 μl，補加1/8體積水110ul，渦旋震蕩10-30秒，使之充分混勻。

4--冰浴放置15min。

5--4℃，12000 rpm（13000 g）離心10 分鐘。 注：離心后白色蛋白沉淀彌散性可見于離心管管壁上。

6--小心去掉上清液，保留沉淀。

注：請小心操作，可以用移液器輔助徹底吸棄上清。

7--沉淀中加入600 μl試劑B，渦旋震蕩10-30秒，徹底混勻。

注：試劑B有刺激性氣味，請在通風櫥內(nèi)操作。

8--冰浴15min。

9--4℃，12000 rpm（13000 g) 離心10分鐘；在通風櫥中，倒掉上清。殘留上清用10 μl吸頭徹底吸棄，沉淀物通風晾干30-60秒。注：沉淀不能過分干燥，否則將導致蛋白不好溶解。

10--蛋白溶解：

根據(jù)下表選擇溶解緩沖液

下游實驗	溶解緩沖液
SDS-PAGE電泳	1×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（變性，還原）。 注：加入溶解緩沖液后，徹底溶解沉淀（37℃溫浴處理），溶液正常顏色應為藍色；如果溶液為淡綠色或黃色，加入1/10體積中和液D，使顏色變回藍色。 95℃ 處理5分鐘，電泳上樣
BCA蛋白定量	40mM 碳酸鈉pH11.25
等電聚焦IEF/2D電泳	7M尿素，2M硫脲，40mM Tris，1%C7B2O或1% ASB-14 pH10.4
酶切實驗	100 mM碳酸氫銨 pH8.5

保存溫度：

試劑盒常溫運輸；收到后，按照標簽溫度貯存；本試劑盒有效期1年