產(chǎn)品名稱：染料法熒光定量PCR試劑盒(含ROX)

---

產(chǎn)品別名：SYBR Green qPCR Master Mix

---

英文名稱：2×qPCR Mix （SYBR Green）

---

英文別名：Realtime PCR Kit，RT-PCR Kit

---

儲存條件：-20°C

---

應用:科研

---

2×qPCR Mix（SYBR Green）

 

產(chǎn)品簡介

本產(chǎn)品是采用SYBR Green I嵌合熒光法進行qPCR的專用試劑，可對目的基因片段進行定量檢測。產(chǎn)品采用了抗體修飾的新型熱啟動Taq DNAPolymerase，配合創(chuàng)新優(yōu)化的最適Buffer，可以在所有Real-Time PCR儀平臺進行高特異性、高靈敏度的qPCR檢測，定量結果準確、重復性好、可信度高。ROX Reference Dye I/II用于校正儀器孔間誤差，可根據(jù)實驗所用儀器選擇添加。

 

產(chǎn)品組成

組分	100 rxns/20μlreaction	500 rxns/20μlreaction
2×qPCR Mix (SYBR Green)	1.0 mL	5×1.0 mL
50×ROXReferenceDye I	40 μL	200 μL
50×ROXReferenceDye II	40 μL	200 μL

 

實驗流程

1. 在qPCR管中配制如下反應體系

2×qPCR Mix (SYBR Green)a	10.0 μl
Primer1 (10 μM)b	0.8 μl
Primer2 (10 μM)b	0.8 μl
Template DNA/cDNAc	x μl
50× ROX Reference Dye I/IId	0.4 μl
ddH2O	Up to 20.0 μl

 

a 使用前請確認完全溶解，并充分混勻。

b通常反應體系中引物終濃度為0.4 μM。當反應性能較差時，可以在終濃度0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)調整優(yōu)化。

c模板加入量因待測基因拷貝數(shù)差異而不同，可進行模板梯度稀釋預試驗得到最佳用量。模板用量建議不超過100 ng。推薦將模板稀釋后加入反應體系中，以提高實驗的重復性。如模板為未稀釋cDNA原液，加入體積不應超過qPCR反應總體積的1/10。

d 根據(jù)所使用Real-TimePCR儀機型確定ROX Reference Dye使用情況，如下所示：

  ROX Reference Dye I: Applied Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast; StepOne, StepOnePlus.

  ROX Reference Dye II: Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7; Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P.

  無需添加ROX Reference Dye: Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Cepheid SmartCycler; Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR;

Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science LightCycler 480; Thermo Scientific PikoReal Cycler.

 

 

 

 

 

 

 

 

2. 按照如下程序進行qPCR反應

階段	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預變性a	95℃	30 sec	1 cycle
循環(huán)反應	95℃	10 sec	40 cycles 60℃采集熒光信號
	60℃	30 sec
溶解曲線b

 

a 該預變性條件適合絕大多數(shù)擴增反應；若模板結構復雜，可延長時間至3min以提高預變性效果。

b 使用儀器默認融解曲線采集程序。

 

保存條件

-25 ~ -15℃避光保存；

2×qPCR Mix解凍后可于2 ~ 8℃避光條件下存放3個月，避免反復凍融。

 

技術支持

本公司產(chǎn)品使用過程中如有任何疑問與建議，歡迎隨時與我們聯(lián)系。