產(chǎn)品名稱：BCA蛋白定量試劑盒

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產(chǎn)品別名：BCA

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英文名稱：BCA Protein Assay Kit

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英文別名：BCA

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儲存條件：RT

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應(yīng)用:科研

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BCA 蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品簡介

          BCA蛋白定量法是利用蛋白質(zhì)可將 Cu²⁺還原成 Cu⁺，而生成的Cu⁺可與BCA形成紫色絡(luò)合物的原理來定量檢測蛋白含量。該方法快速、穩(wěn)定、選擇性好，不受蛋白種類影響、且在一定濃度范圍內(nèi)受表面活性劑影響小，成為目前應(yīng)用最廣泛的蛋白定量方法之一，可實(shí)現(xiàn)對蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測定。本試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品采用高質(zhì)量BSA且可以4℃保存，使實(shí)驗(yàn)更精準(zhǔn)便捷。

使用方法

         1. 按下表在酶標(biāo)板中做蛋白標(biāo)準(zhǔn)品稀釋。稀釋時，先向每孔加入對應(yīng)體積二次水，再按照蛋白濃度由低到高的順序依次加入蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液，混勻。標(biāo)準(zhǔn)孔稀釋好后，再根據(jù)需要向空孔中加入原樣或稀釋后的樣品溶液，每孔20μL。建議標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔均做3次平行對照。

	1	2	3	4	5	6	7	8	9
二次水 (μL)	20	19.5	19	18	16	12	8	4	0
蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 (μL)	0	0.5	1	2	4	8	12	16	20
蛋白含量 (μg)	0	0.5	1.0	2.0	4.0	8.0	12.0	16.0	20.0

          2. 工作液按照BCA試劑 A和BCA試劑 B以50:1的比例混合，每孔加200 μL，混勻。所需工作液總體積 μL =200 μL×總孔數(shù)×1.1。1.1系數(shù)可自行調(diào)整，保證每孔有足量工作液加入即可。

          3. 將酶標(biāo)板放入水浴鍋中（不可將酶標(biāo)板浸于水中），37℃孵育30 min或目測更合適時間，如樣本蛋白濃度過低也可60℃孵育，孵育時如酶標(biāo)板蓋板冷凝水較多時，可用吸水紙擦去。孵育結(jié)束后，用酶標(biāo)儀或nano drop測定每孔562 nm處的吸光值。

           4. 以每孔蛋白含量為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品每孔吸光度減去空白孔吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算樣品孔蛋白含量。計(jì)算樣品孔蛋白含量時，所用吸光度值應(yīng)扣去空白孔數(shù)值。樣品蛋白濃度μg/μL= 標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出的樣品孔蛋白含量μg÷20 μL，如測定樣品經(jīng)過額外稀釋，在計(jì)算原樣時還應(yīng)還應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項(xiàng)：

           1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品原液為1 μg/μL，方便自行設(shè)計(jì)蛋白標(biāo)準(zhǔn)孔含量梯度。標(biāo)準(zhǔn)孔加入的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品原液體積數(shù) (μL) 即為該孔的蛋白絕對含量值 (μg)，再用二次水補(bǔ)足體積至20 μL即可。

           2. 本試劑盒每孔最小檢測蛋白量為0.5 μg。

         3. 確保樣品中SDS、Triton X-100、Tween等表面活性劑含量低于5%，EDTA低于10 mM，無EGTA，DTT、β-巰基乙醇低于1 mM。

貯存條件

          BCA試劑 A與BCA試劑 B室溫保存，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存。

包裝規(guī)格

          

BCA試劑盒	A液	B液	1 μg/μL蛋白標(biāo)準(zhǔn)品
50ML	50ml	1ml	5ml
100ML	100ml	2ml	10ml
500ML	500ml	10ml	50ml